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Tipo do documento: Dissertação
Título: Expressão em Escherichia coli de Quitinase (E.C. 3.2.1.14) de Chromobacterium violaceum
Autor: Neiva, Márcia 
Primeiro orientador: Astolfi Filho, Spartaco
Primeiro membro da banca: Marco, Janice Lisboa de
Segundo membro da banca: Vicente, Elisabete Jose
Terceiro membro da banca: Yamane, Tetsuo
Quarto membro da banca: Pereira, José Odair
Resumo: A conclusão do seqüenciamento do genoma de Chromobacterium violaceum deu origem à necessidade de caracterizar a funcionalidade dos genes anotados presentes no cromossomo essa bactéria. Em seu genoma foram encontradas várias ORFs (Open Reading Frames), correspondentes a genes de interesse biotecnológico, e entre eles cinco que codificam quitinases. Esse trabalho apresenta os resultados da clonagem e expressão dos genes que codificam quitinases de Chromobacterium violaceum. Foram selecionadas quatro ORFs cujas seqüências de DNA foram obtidas por meio de PCR, com iniciadores específicos. Foram utilizadas duas estratégias neste trabalho, a clonagem da seqüência completa dos genes, e outra a clonagem da região codificadora fusionada com a seqüência da subunidade B da proteína A de Staphylococcus aureus, utilizando sinais de transcrição e tradução de um vetor de expressão conhecido. A primeira estratégia não produziu resultados conclusivos, pois não se obteve sucesso na clonagem. Com a segunda estratégia foi obtida expressão da seqüência correspondente a ORF CV2736 , cuja proteína foi expressa em altos níveis e apresentou atividade frente ao substrato.
Abstract: The sequencing of the Chromobacterium violaceum genome generated the necessity of characterizes the genetic function of the transcripts present in this bacterial chromosome set. In this genome were found several ORFs (Open Read Frame) corresponding to the biotechnological target genes, and among them five that codify Chitinases. This work shows the results obtained with cloning and express chitinases genes of Chromobacterium violaceum We selected four ORFs who s the DNA sequences were obtained by PCR, with specific primers. Two strategies were utilized in this work, one was cloning the complete gene sequence, and other was cloning the code region in a fusion with the Staphylococcus aureus B subunit of A protein, using the transcription and translation signals of a known expression vector. The first strategy didn t produce good results because we didn t obtained success with cloning. The second strategy it made possible the expression of the sequence corresponding to ORF CV2736, who s the enzyme was obtained in high levels and presented activity when in contact with substrate.
Palavras-chave: Genética
Biotecnologia
Chromobacterium violaceum
Quitinase
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia
Sigla da instituição: INPA
Departamento: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Citação: NEIVA, Márcia. Expressão em Escherichia coli de Quitinase (E.C. 3.2.1.14) de Chromobacterium violaceum. 2005. 100 f. Dissertação (Mestrado em Genética, Conservação e Biologia Evolutiva) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Manaus, 2005.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://localhost:8080/tede/handle/tede/679
Data de defesa: 17-Ago-2005
Aparece nas coleções:Mestrado - (GCBEv)

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