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Tipo do documento: Dissertação
Título: ISOLAMENTO, CARACTERIZAÇÃO DE LOCOS MICROSSATÉLITES E ANÁLISE DA VARIABILIDADE GENÉTICA DE DUAS POPULAÇÕES DE Anopheles (N.) darlingi (DIPTERA: CULICIDAE) DO ESTADO DO AMAZONAS
Autor: Lima, Graciela Nascimento 
Primeiro orientador: Santos, Joselita Maria Mendes dos
Primeiro membro da banca: Carvalho-zilse, Gislene Almeida
Segundo membro da banca: Clement, Charles Roland
Terceiro membro da banca: Val, Vera Maria Fonseca de Almeida e
Quarto membro da banca: Cavallari, Marcelo Mattos
Quinto membro da banca: Batista, Jacqueline da Silva
Resumo: Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi é o principal vetor da malária humana em todo o país, e particularmente na Amazônia. É considerada a mais antropofílica e endofágica de todas as espécies de Anopheles nas Américas. Diante disso, vários estudos têm utilizado diferentes marcadores moleculares para conhecer a estrutura genética populacional e entender os mecanismos envolvidos na dinâmica de transmissão da malária. Entre esses marcadores, os microssatélites vêm sendo muito eficientes em estudos populacionais apresentando um elevado conteúdo de informação de polimorfismo e no esclarecimento do status taxonômico das espécies de mosquitos. Considerando a importância epidemiológica e a necessidade de se conhecer melhor a estrutura genética das populações dessa espécie, foram desenvolvidos novos marcadores microssatélites e analisada a variabilidade genética de duas populações do Estado do Amazonas. A biblioteca genômica enriquecida com microssatélites (SSR) apresentou 77 clones (80,2%) com sequências nucleotídicas de boa qualidade e 1,3% de redundância. Destes, 73 clones (94,8%) apresentaram sequências com SSRs, gerando um total de 124 microssatélites na biblioteca, sendo 1,7 a média por clone. A partir de 63 clones (81,8%) foram desenhados 69 pares de primers, sendo 66 sintetizados. Trinta e seis marcadores microssatélites foram isolados e caracterizados em 12-32 indivíduos de A. darlingi coletados em Coari (Amazonas-Brasil). Foram obtidos um total de 270 alelos, variando entre 3 a 14 alelos por loco, com uma média de 6,95. A heterozigosidade observada (HO) variou entre 0,037 a 0,947 (media de 0,524), enquanto a heterozigosidade esperada (HE) variou entre 0,177 a 0,883 (média de 0,735). A amplificação heteróloga de 24 locos microssatélites resultou de 8 a 13 locos polimórficos entre três espécies do gênero Anopheles [A. benarrochi, A. rangeli e A. triannulatus]. Um total de 96 alelos foram observados nas duas populações do Estado do Amazonas (Coari e São Gabriel da Cachoeira) entre os 12 locos utilizados na análise da variabilidade genética, com uma média de 8 alelos por loco. Heterozigosidades observada e esperada elevadas (HO= 0,654 e HE= 0,742), indicando alta variabilidade genética. As estatísticas F de Wright revelaram baixa diferenciação genética entre as populações (FST= 0,028). A distância genética de Nei (1978) entre as duas populações foi muito baixa (0,0962), indicando grande similaridade genética entre elas. A análise Bayesiana implementada no programa STRUCTURE, evidenciou a existência de apenas um cluster (k=1), sendo considerada uma única população.
Abstract: Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi is the main vector of the human malaria in all of the country, particularly in the Amazon region. It s considered the most anthropophilic and endophagic of all Anopheles species in the Americas. Given this many studies have used different molecular markers to know the population genetic structure and understand the mechanisms involved in the dynamics of malaria transmission. Among these markers the microsatellite have been very efficient in population studies presenting a high polymorphism information content and highlight the taxonomic status of the mosquitoes species. Considering the epidemiological importance and the need to better understand the genetic structure of this species population new microsatellite markers were developed and analyzed the genetic variability in two populations from Amazonas State. The genomic library enriched with microsatellite (SSR) showed 77 clones (80.2 %) with good nucleotide sequences and 1.3% redundancy. Of these, 73 clones (94.8%) had sequences with SSRs generating a total of 124 microsatellite in the library, the average being 1.7 per clone. From 63 clones (81.8%) were designed 69 primer pairs and 66 synthesized. Thirty-six microsatellite markers were isolated and characterized in 12-32 individuals of A. darling collected in Coari (Amazonas-Brazil). Were obtained 270 alleles in total, ranging from 3-14 alleles per locus, with an average of 6.95. The observed heterozygosity (HO) ranged from 0.037 to 0.947 (mean 0.524), while the expected heterozygosity (HE) ranged between 0.177 to 0.883 (mean 0.735). The heterologous amplification of 24 microsatellite loci resulted in 8-13 polymorphic loci among three species of the Anopheles [A. benarrochi, A. rangeli and A. triannulatus] genus. A total of 96 alleles were observed in two populations from Amazonas State (Coari e São Gabriel da Cachoeira) among 12 loci used in the analysis of genetic variability, with an average of 8 alleles per locus, high observed and expected heterozygosities (HO = 0.654 and HE = 0.742), indicating high genetic variability. The Wright's F statistics revealed low genetic differentiation between populations (FST= 0.028). The genetic distance between the two populations was very low (0.0962), indicating great genetic similarity between them. The Bayesian analysis implemented in the program STRUCTURE revealed the existence of only one cluster (k=1), being considered a single population.
Palavras-chave: Anófeles
DNA microssatélite
Genética de populações
Malária
Anopheles darlingi
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia
Sigla da instituição: INPA
Departamento: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Citação: LIMA, Graciela Nascimento. ISOLAMENTO, CARACTERIZAÇÃO DE LOCOS MICROSSATÉLITES E ANÁLISE DA VARIABILIDADE GENÉTICA DE DUAS POPULAÇÕES DE Anopheles (N.) darlingi (DIPTERA: CULICIDAE) DO ESTADO DO AMAZONAS. 2010. 78 f. Dissertação (Mestrado em Genética, Conservação e Biologia Evolutiva) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Manaus, 2010.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://localhost:8080/tede/handle/tede/687
Data de defesa: 10-Ago-2010
Aparece nas coleções:Mestrado - (GCBEv)

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