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Tipo do documento: Tese
Título: Análise do transcritoma de etiquetas de sequências expressas da hipófise e parte do cérebro do tambaqui (Colossoma macropomum) e expressão do cDNA do hormônio de crescimento em Pichia pastoris
Autor: Sousa, Alexandra Regina Bentes de 
Primeiro orientador: Porto, Jorge Ivan Rebelo
Primeiro coorientador: Astolfi Filho, Spartaco
Primeiro membro da banca: Hilsdorf, Alexandre Wagner Silva
Segundo membro da banca: Schneider, Maria Paula Cruz
Terceiro membro da banca: Brigido, Marcelo de Macedo
Quarto membro da banca: Torres, Fernando Araripe Gonçalves
Quinto membro da banca: Nozawa, Sérgio Ricardo
Resumo: O tambaqui, Colossoma macropomum, é um peixe de grande valor comercial para região amazônica e representa uma espécie modelo para a região em vista dos inúmeros estudos a seu respeito, quer seja pela biologia, fisiologia e genética. Devido a sua grande importância, o objetivo desse trabalho foi construir e caracterizar uma biblioteca de cDNA mista de hipófise e partes do cérebro, identificar transcritos através de anotação genômica utilizando ferramentas de bioinformática, para categorização dos transcritos e posteriormente identificação de genes de interesse biotecnológico, seguido da expressão e secreção de um deles na forma recombinante. A biblioteca gerada foi sequenciada e como resultado foi obtido 1728 clones que resultaram em 1060 ESTs agrupados em 184 contig s e 12 singlets. A maioria dos genes conhecidos, encontrados na presente análise, está relacionada com os genes ribossomais, seguido dos genes mitocondriais. Além desses, outros transcritos importantes foram identificados e o índice de novidade foi de 43%. Nessas análises, foi possível identificar e isolar o gene do hormônio de crescimento (GH) e logo iniciar o estudo de expressão e secreção do hormônio de crescimento recombinante do tambaqui (tGH) no sistema Pichia pastoris. A partir da sequência de cDNA do tambaqui, a região estrutural do gene do hormônio de crescimento foi construída por síntese química e introduzida no cassete de expressão/ secreção do vetor pPIC9. O plasmídeo recombinante denominado tGH foi introduzido em células de P. pastoris por eletroporação, os clones recombinantes foram selecionados pelo marcador genético auxotrófico HIS4. A maior expressão do tGH pela P. pastoris GS115 foi alcançada após 72 h de cultivo. A massa molecular estimada em gel de SDS-PAGE 15% revelou que o tamanho do tGH era de 22 kDa, similar ao tamanho do hormônio de crescimento de outras espécies de vertebrados descritos na literatura. Dessa forma, o tGH dessa importante espécie para aquicultura local poderá ser posteriormente aplicado em ensaios experimentais, visando o futuro uso como fator de aceleração do crescimento de peixes de interesse comercial. Tais resultados abrem perspectivas para um estudo mais amplo tanto na área genômica quanto na aplicação do hormônio de crescimento recombinante na piscicultura.
Abstract: The tambaqui, Colossoma macropomum, is a fish of great commercial value to the Amazon region and represents an emblematic species taking into account the studies carried out on its biology, physiology and genetics. Due to its importance, the aim of this study was to construct and characterize a cDNA library of mixed parts of the hypophysis and the brain in order to identify transcripts by genome annotation using bioinformatics tools for categorization of the transcripts. Genes of biotechnological interest, followed by the expression and secretion of one of them in recombinant form were also identified. A total of 1728 clones were sequenced that resulted in 1060 ESTs grouped into 184 contig s and 12 singlets. Most of the known genes found in this analysis is related to the ribosomal genes, followed by mitochondrial genes. In addition, other important transcripts were identified and the novelty index was 43%., it was possible to identify and isolate growth hormone gene (GH) and then start the study of expression and secretion of recombinant growth hormone in tambaqui (tGH) in the Pichia pastoris. The structural gene region of growth hormone was constructed by chemical synthesis and inserted into pPIC9. The recombinant plasmid named tGH was introduced into cells of P. pastoris by electroporation, recombinant clones were selected by auxotrophic marker gene His4. The highest expression of tGH by P. pastoris GS115 was reached after 72 h of culture. The molecular mass estimated by SDS-PAGE 15% revealed that the size of tGH was 22 kDa, similar to the size of the growth hormone of other species of vertebrates described in the literature. Thus, the tGH of this important species for aquaculture can then be applied in experimental tests in the near future as a factor iforaccelerating the fish growth. These results open perspectives for a broader study, both in the genome and in the application of recombinant piscine growth hormone in fish farming.
Palavras-chave: Tambaqui
cDNA
ESTs.
Hormônio de crescimento
Expressão heteróloga
Pichia pastoris.
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia
Sigla da instituição: INPA
Departamento: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Citação: SOUSA, Alexandra Regina Bentes de. Análise do transcritoma de etiquetas de sequências expressas da hipófise e parte do cérebro do tambaqui (Colossoma macropomum) e expressão do cDNA do hormônio de crescimento em Pichia pastoris. 2009. 77 f. Tese (Doutorado em Genética, Conservação e Biologia Evolutiva) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Doutor em Ciências Biológicas, 2009.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://localhost:8080/tede/handle/tede/717
Data de defesa: 28-Dez-2009
Aparece nas coleções:Doutorado - (GCBEv)

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