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Tipo do documento: Dissertação
Título: Expressão diferencial de genes relacionados à resposta imune do mosquito Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi
Autor: Fernandes, Lincoln Rayath Lima 
Primeiro orientador: Rafael, Míriam Silvia
Primeiro coorientador: Matiolli, Cleverson
Resumo: O Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926 é considerado vetor primário da malária na América do Sul, com os registros mais altos dessa doença na região amazônica. Nas últimas décadas, estudos mostram que as respostas imunes em insetos, como no Anopheles gambiae, vetor da malária, são em grande parte re-guladas pelas vias Toll e Imd (imunodeficiência), por meio dos fatores de transcri-ção NF-kapa-β Rel1 e Rel2, que são controlados pelos reguladores negativos Cactus e Caspar. Alternativas para detecção e quantificação da expressão gênica, em nível genômico, têm sido realizadas por meio da análise de fragmentos de cDNA amplificados, pelo método de Reação em Cadeia da Polimerase, em Tempo Real (qRT-PCR). No presente trabalho foi analisada, pela primeira vez, a expres-são quantitativa de RNA mensageiro dos genes Rel1, Rel2, Caspar e Cactus rela-cionados ao sistema imune em fêmeas adultas alimentadas e fêmeas não alimen-tadas de Anopheles darlingi, comparados aos indivíduos controle (fêmeas adultas não alimentadas), utilizando os marcadores GAPDH e β-actina, como genes de referência. Larvas de A. darlingi foram coletadas no bairro Puraquequara, Manaus, Estado do Amazonas, que após serem identificadas foram mantidas em laborató-rio até a fase adulta. Fêmeas adultas foram alimentadas com sangue e após 4, 8, 14 e 24 horas foram congeladas a 80 oC negativos. Obtiveram-se a extração e purificação do RNA total com o Kit de extração da Quiagen® e a fita complemen-tar de RNAm (cDNA), com o kit da Promega®. Primers dos genes Rel1, Rel2, Caspar e Cactus foram desenhados com o Programa “Gene Runer”. O protocolo da qRT-PCR foi segundo o sistema SYBR Green® (Applied Biosystems®) e as amplificações realizadas no termociclador ABI-7500™ Real-Time PCR System, Applied Biosystems®. As análises mostraram que os níveis de expressão dos ge-nes Rel1, Rel2, Caspar e Cactus foram bastante variáveis entre esses genes nos horários de 4, 8, 14 e 24 horas, após alimentação sanguínea comparada ao con-trole (0 hora) de fêmeas adultas não alimentadas. O gene Rel1, em comparação aos seus controles, apresentou maior nível de expressão em relação aos genes Rel2, Caspar e Cactus após a alimentação sanguínea, nos intervalos de 8 e 14 horas. Essa diferença na expressão gênica diferencial dessas amostras pode es-tar relacionada ao seu estado imune. Estes achados são importantes para o en-tendimento do sistema de resposta imune de A. darlingi, e útil para outras indaga-ções e perspectivas acerca do controle desse mosquito.
Abstract: The Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi Root, 1926 is considered the primary ma-laria vector in South America, with the highest records in the Amazon region. In recent decades, studies have shown that immune responses in insects such as Anopheles gambiae in, vector of malaria are largely regulated by pathways Toll and Imd (immunodeficiency), through the NF-kappa β transcription factors and Rel1 Rel2 which are controlled by negative regulators Cactus and Cas-par. Alternatives for detection and quantification of gene expression at the genomic level have been carried out through analysis of cDNA fragments amplified by the method of Polymerase Chain Reaction in Real Time (qRT-PCR). The present study examined for the first time, quantitative mRNA expression of Rel1, Rel2, Caspar and Cactus genes related to the immune system in fed adult females and females not fed Anopheles darlingi, using GAPDH and β-actin markers, as refer-ence genes. Anopheles darlingi larvae were collected in the vicinity of Manaus, Amazonas, which were identified after being kept in the laboratory until adult-hood. Adult females were fed with blood meal, and after 4, 8, 14 and 24 hours were frozen at negative 80 oC. The extraction and purification of RNA were ob-tained with the Qiagen® kit and the complementary strand of mRNA (cDNA) with a Promega® kit. Primers of Rel1, Rel2, Caspar and Cactus genes were designed with the "Gene Runer" Program. The protocol for qRT-PCR was according to SYBR ® Green (Applied Biosystems ®) and the amplifications carried out in the ABI-7500 thermocycler ™ Real-Time PCR System, Applied Biosystems ®. The analyzes showed that the expression levels of Rel1, Rel2, Caspar and Cactus genes varied widely among these genes during 4, 8, 14 and 24 hours after blood feeding compared to adult females control not fed (0 h). The Rel1 gene, compared to the controls, showed higher expression level compared to Rel2, Caspar and Cactus genes after the blood meal, in the intervals of 8 and 14 hours. This differ-ence in the differential gene expression of these samples may be related to their immune status. These findings are important for understanding the response of the immune system of A. darlingi, and useful to respond other questions and perspec-tives about mosquito control.
Palavras-chave: Malária
Anopheles
Vetor - Malária
Área(s) do CNPq: CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia
Sigla da instituição: INPA
Departamento: Coordenação de Pós Graduação (COPG)
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva (GCBEv)
Citação: FERNANDES, Lincoln Rayath Lima. Expressão diferencial de genes relacionados à resposta imune do mosquito Anopheles (Nyssorhynchus) darlingi. Manaus: [s.n.], 2014. xiv, 41 f.. Tese (Genética, Conservação e Biologia Evolutiva (GCBEv)) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://localhost:8080/tede/handle/tede/1552
Data de defesa: 3-Jun-2014
Aparece nas coleções:Mestrado - (GCBEv)

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