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Tipo do documento: Dissertação
Título: Isolamento e Caracterização de Locos Microssatélites para o vetor da malária Anopheles nuneztovari sensu lato
Autor: Cardoza, Tatiana Bacry 
Primeiro orientador: Scarpassa, Vera Margarete
Resumo: Anopheles nuneztovari é considerada um importante vetor da malária humana no norte e oeste da Colômbia e oeste da Venezuela. Na Amazônia brasileira, embora esta espécie tenha sido encontrada infectada com o parasito da malária, o seu envolvimento na transmissão desta doença é bastante controverso. Estudos genéticos recentes indicam a existência de cinco “linhagens” dentro do táxon A. nuneztovari, que podem diferir quanto à capacidade de transmitir o agente etiológico que causa a malária. Neste sentido, estudos genéticos adicionais com marcadores microssatélites podem auxiliar a esclarecer as relações genéticas entre estas linhagens e proporcionar uma melhor compreensão da dinâmica de transmissão da malária envolvendo esta espécie na Amazônia brasileira. Para isso foram desenvolvidos marcadores microssatélites a partir de uma biblioteca genômica enriquecida com seqüências de CT8 e GT8. A biblioteca genômica foi desenvolvida utilizando amostras procedentes das periferias das cidades de Manaus (Amazonas) e de Nova Mazagão (Amapá). Um total de 192 clones positivos foram sequenciados, dos quais foi possível desenhar 58 pares de primers flanqueadores das regiões de microssatélites. Observou-se microssatélites com diferentes motivos de repetições. Dentre eles, 74,36% foram dinucleotídeos, 15,38% trinucleotídeos, 6,41% tetranucleotídeos e 3,85% pentanucleotídeos, sendo 79,49% microssatélites simples perfeitos, 6,41% simples imperfeitos e 14,01% compostos perfeitos e imperfeitos. Foram sintetizados 41 pares de primers, dos quais 28 amplificaram com sucesso e 18 foram caracterizados em uma amostra de Manaus, com um número amostral que variou de 34 a 39 indivíduos. Todos os locos microssatélites foram polimórficos. O número de alelos por loco variou de 2 a 13. A heterozigosidade observada (HO) variou entre 0,079 e 0,921, enquanto a heterozigosidade esperada (HE) variou entre 0,078 e 0,872. O conteúdo de polimorfismo informativo (PIC) variou entre 0,088 e 0,854. Após a correção de Bonferroni seis locos mostraram-se em desequilíbrio de Hardy-Weinberg. Alem disso, sete locos polimórficos foram testados para amplificação heteróloga em cinco espécies de Anopheles: Anopheles rangeli, Anopheles dunhami, Anopheles konderi, Anopheles oswaldoi sensu lato e Anopheles darlingi. Os sete locos amplificaram com sucesso para todas as espécies, exceto em A. darlingi, que não houve amplificação para nenhum loco. Esses resultados comprovam a eficiência dos marcadores microssatélites para determinar o polimorfismo e futuramente caracterizar, no nível molecular, as linhagens de A. nuneztovari.
Abstract: Anopheles nuneztovari is considered an important vector of human malaria in northern and western Colombia and western Venezuela. In the Brazilian Amazon, although this species has been found infected with the malaria parasite, their involvement in transmission is quite controversial. Recent genetic studies indicate that there are five lineages within the taxon A. nuneztovari, which may differ in their capacity to transmit the etiologic agent that causes malaria. In this sense, additional genetic studies using microsatellite markers may help to clarify the genetic relationships among these strains and provide a better understanding of the dynamics of malaria transmission involving this species in the Brazilian Amazon. Microsatellite markers were developed from a genomic library enriched with sequences CT8 and GT8. The genomic library was developed with samples obtained from the outskirts of the cities of Manaus (Amazonas) and Nova Mazagão (Amapá). A total of 192 positive clones were sequenced and a total of 58 pairs of primers were drawn. Among them, 74.36% were dinucleotide, 15.38% trinucleotide, 6.41% tetranucleotide and 3.85% pentanucleotide, and 79.49% are simple perfect microsatellites, imperfect and mere 6.41% and 14.01% compound perfect and imperfect. From these, 41 primers pairs were synthesized, and 23 were successfully amplified. All 18 microsatellite loci were characterized were polymorphic. The number of alleles per locus ranged from 2 to 13. The observed heterozygosity (Ho) ranged from 0.079 to 0.921, while the expected heterozygosity (He) ranged from 0.078 to 0.872. The polymorphism information content (PIC) ranged from 0.088 to 0.854. We tested seven polymorphic markers for heterologous amplification in five species of Anopheles: Anopheles rangeli, Anopheles dunhami, Anopheles konderi, Anopheles oswaldoi sensu lato and Anopheles darlingi. The seven loci were successfully amplified for all species, except in An. darlingi, that did not amplify any locus. These results demonstrate the efficiency of microsatellite markers to determine polymorphism for future molecular characterization of A. nuneztovari lineages
Palavras-chave: Anopheles 2
DNA microssatélites
Malária
Área(s) do CNPq: CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia
Sigla da instituição: INPA
Departamento: Coordenação de Pós Graduação (COPG)
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva (GCBEv)
Citação: CARDOZA, Tatiana Bacry. Isolamento e Caracterização de Locos Microssatélites para o vetor da malária Anopheles nuneztovari sensu lato. Manaus: [s.n.], 2011. ix, 48p. Dissertação( Genética, Conservação e Biologia Evolutiva (GCBEv)) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
Endereço da licença: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
URI: http://localhost:8080/tede/handle/tede/1714
Data de defesa: 22-Mar-2011
Aparece nas coleções:Mestrado - (GCBEv)

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