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Tipo do documento: Dissertação
Título: EXPRESSÃO GÊNICA DIFERENCIAL EM TAMBAQUIS, Colossoma macropomum (Cuvier, 1818), EXPOSTOS AO PETRÓLEO E A HIPOXIA.
Autor: Pinheiro, Luciano Ricardo Braga 
Primeiro orientador: Val, Vera Maria Fonseca de Almeida e
Primeiro coorientador: Nozawa, Sérgio Ricardo
Primeiro membro da banca: Martins, Cesar
Segundo membro da banca: Cândido, Alexandre Luna
Terceiro membro da banca: Resende, Mauricio
Quarto membro da banca: Bicudo, Jose Eduardo Pereira Wilken
Quinto membro da banca: Castellen, Milene da Silva
Resumo: A exploração de petróleo na Bacia Amazônica já é uma realidade. As condições de pH, sedimentos precipitados, vegetação, oxigenação e vazão neste ambiente são tão peculiares que é difícil avaliar com precisão quais os reais impactos de um vazamento de óleo em águas interiores na Amazônia. Neste trabalho o Tambaqui, peixe endêmico da Bacia Amazônica, foi avaliado como alternativa de biomarcador de contaminação por petróleo. Por meio da técnica de DD RT-PCR investigamos o padrão de expressão gênica em juvenis de Tambaquis expostos a concentrações subletais e o dobro da concentração letal de óleo cru nos intervalos de tempo de 3, 6 e 12 horas, sendo este último tempo o período proposto para recuperação, sob condições de normóxia e hipóxia. Após os experimentos os animais foram sacrificados e o fígado imediatamente congelado em nitrogênio líquido para posterior extração do RNA. A síntese da fita complementar de cDNA foi feita por 3 iniciadores poli-T ancorados com nucleotídeos terminais C,G ou A. A reação de amplificação se deu combinando os iniciadores poliT com outros 5 iniciadores heterólogos de 13 nucleotídeos. O produto amplificado foi revelado em gel de agarose 2,5% e corado com brometo de etídium, sendo as bandas diferencialmente expressas eluídas e clonadas com E.coli com Vetor P-gen easy sistem para posterior seqüenciamento e comparação com bancos públicos de EST´s. Foram identificados 4 genes: (i) RAG2 (recombination-activating genes); (2) ERK (mitogen-activated protein kinase); (iii) GR (glutathione reductase); e (iv) CFTR. Os três últimos estão amplamente reportados como agentes do processo de desintoxicação, enquanto que o primeiro é um regulador na formação de células do sistema imune. RAG2 e ERK também estão envolvidos em mecanismos de apoptose celular (morte programada da célula), GR no processo antioxidante em condições de estresse ambiental e CFTR como regulador de Cálcio em brânquias de peixes. O método de DD RT-PCR mostrou-se eficiente no processo de identificar vias bioquímicas que habilitem organismos da Bacia Amazônica como biomarcadores de poluição ambiental causada por petróleo.
Abstract: Petroleum industry is a reality in the Amazon region. Specific sediment and pH, along with water level changes, which induce specific patterns of oxygenation and floating vegetation, make such a complex environment that becomes difficult to predict all impacts of an oil spill in the Amazon basin. The present work investigates the effects of petroleum exposure on Tambaqui, an endemic Amazon fish species, Differential Display RT-PCR was applied to reveal differential expressed genes between juveniles exposed and non-exposed to petroleum; sub-letal concentrations, twice letal concentration at three and six hours. Recovery was measured after 6 hours under both conditions: hypoxia and normoxia. After the experiments fish were killed and liver was immediately excised and frozen in liquid nitrogen. RNA was then extracted. cDNA was obtained after hybridization with poli-T primers anchored with terminal nucleotides C, G, or A. Amplifying reaction was performed combining poli-T primers with five heterologous primers with 13 nucleotides. Amplified product was visualized after electrophoresis in 2.5% agarose gel and stained with ethidium bromide. The differentially expressed bands were eluted and cloned with E.coli Vector P-gen easy system, and sequenced. The sequences were compared with EST s public banks. Four genes were identified: (i) RAG2 (recombination-activating genes); (2) ERK (mitogen-activated protein kinase); (iii) GR (glutathione reductase); e (iv) CFTR. The last three are well reported as detoxifying agents while the first regulates cell formation for immune system. RAG2 and ERK are also involved in cell apoptosis. GR is involved in the antioxidant process after environmental stress exposure. CFTR regulates Calcium uptake at fish branchial level. Thus, DD RT-PCR is an efficient method to identify the main biochemical pathways involved in the responses of fish to petroleum exposure.
Palavras-chave: Colossoma macropomum - Expressão gênica
Poluição ambiental - Petróleo
Tambaqui - Biomarcador
Área(s) do CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA
Idioma: por
País: BR
Instituição: Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia
Sigla da instituição: INPA
Departamento: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Programa: Genética, Conservação e Biologia Evolutiva
Citação: PINHEIRO, Luciano Ricardo Braga. EXPRESSÃO GÊNICA DIFERENCIAL EM TAMBAQUIS, Colossoma macropomum (Cuvier, 1818), EXPOSTOS AO PETRÓLEO E A HIPOXIA.. 2007. 75 f. Dissertação (Mestrado em Genética, Conservação e Biologia Evolutiva) - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Manaus, 2007.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://localhost:8080/tede/handle/tede/682
Data de defesa: 17-Set-2007
Aparece nas coleções:Mestrado - (GCBEv)

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